建立了液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）肽组学鉴定多肽地龙蛋白压片糖果中多肽及高效液相色谱（HPLC）检测多肽含量新方法。本文联用LC-MS/MS与De novo分离初步鉴定多肽地龙蛋白压片糖果中多肽成分，采用化学合成法制备多肽，进一步利用HPLC验证并测定其多肽含量。总共鉴定出482个多肽序列，对相对强度和评分较高的10条多肽进行化学合成，成功在多肽地龙蛋白压片糖果实际样品中验证到氨基酸序列为LAPVNKPGRF（LF-10）的多肽，实验测得LF-10的含量为0.00182%。LC-MS/MS与De novo的联用为地龙多肽类成分的鉴定分析提供有力的支持，建立的LF-10多肽HPLC定量分析方法简便易行、准确可靠，有助于多肽地龙蛋白压片糖果的质量控制及地龙多肽的进一步研究。